Qual, dentre as definições abaixo, descreve o ensaio de imunoabsorção por ligação enzimática (ELISA- enzyme-linked immunosorbent assay) amplamente utilizado como técnica padrão tanto nas aplicações clínicas quanto na pesquisa?
Qual, dentre as definições abaixo, descreve o ensaio de imunoabsorção por ligação enzimática (ELISA- enzyme-linked immunosorbent assay) amplamente utilizado como técnica padrão tanto nas aplicações clínicas quanto na pesquisa?
- A)Técnica para detectar a presença de um antígeno nas seções de tecido histológico pelo uso de um anticorpo ligado à enzima que seja específico ao antígeno. A enzima converte um substrato incolor em uma substância insolúvel colorida que se precipita no local onde o anticorpo e o antígeno estão localizados (seção tecidual) e é observado por microscopia óptica.
- B)Técnica analítica em que os anticorpos são usados para detectar a presença de uma ligação do antígeno a uma matriz sólida de papel de filtro.
- C)Técnica utilizada para quantificar antígeno ou anticorpo. Uma quantidade fixa de anticorpo ou antígeno, dependendo do que se quer quantificar, é ligada a uma série de suportes sólidos replicados, como cavidades plásticas de microtitulação. Soluções padrões com concentrações conhecidas e soluções teste com concentrações desconhecidas são adicionadas as cavidades para que ocorra ligação antígeno-anticorpo. Após lavagem, adiciona-se uma quantidade de anticorpo acoplado à enzima que se liga ao complexo já formado e em seguida acrescenta-se o substrato da enzima. Os resultados obtidos nas soluções-padrão são utilizados para a construção de uma curva, a partir da qual as quantidades das soluções-teste podem ser inferidas.
- D)Técnica utilizada para isolamento de uma molécula de uma solução ligado-a a um anticorpo e tornando o complexo antígeno-anticorpo insolúvel, pela precipitação com um segundo antianticorpo ou pela ligação do primeiro anticorpo a uma partícula ou esfera insolúveis.
Resposta:
A alternativa correta é C)
O ensaio de imunoabsorção por ligação enzimática, conhecido como ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay), é uma técnica amplamente utilizada tanto em pesquisas quanto em diagnósticos clínicos devido à sua sensibilidade e versatilidade. Entre as definições apresentadas, a alternativa C é a que melhor descreve esse método.
O ELISA baseia-se na quantificação de antígenos ou anticorpos por meio de uma reação enzimática. O procedimento envolve a imobilização de um anticorpo ou antígeno em uma superfície sólida, como as cavidades de uma placa de microtitulação. Em seguida, amostras contendo concentrações conhecidas (padrões) e desconhecidas (teste) são adicionadas para permitir a ligação específica antígeno-anticorpo. Após lavagens para remover componentes não ligados, um anticorpo secundário conjugado a uma enzima é adicionado, formando um complexo com o antígeno ou anticorpo alvo. A adição de um substrato específico para a enzima gera um produto colorido ou fluorescente, cuja intensidade é medida e correlacionada com a concentração do analito de interesse por meio de uma curva padrão.
As outras alternativas não descrevem corretamente o ELISA. A alternativa A refere-se à técnica de imuno-histoquímica, que utiliza anticorpos marcados para detectar antígenos em cortes histológicos. A alternativa B menciona uma matriz de papel de filtro, o que não corresponde ao suporte sólido (geralmente plástico) usado no ELISA. Já a alternativa D descreve métodos de precipitação imune, como a imunoprecipitação, que não envolvem a detecção enzimática característica do ELISA.
Portanto, a resposta correta é C, pois essa definição abrange os princípios fundamentais do ELISA: quantificação, uso de enzimas como marcadores e a construção de curvas padrão para análise dos resultados.
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