No final dos anos 1960 um evento importante no desenvolvimento dos métodos de genética molecular foi a descoberta das enzimas de restrição, também chamadas de endonucleases de restrição, as quais reconhecem e fazem cortes de fita dupla no DNA em sequências de nucleotídeos especificas. Essas enzimas são produzidas naturalmente pelas bactérias e usadas na defesa contra vírus. Uma bactéria protege seu próprio DNA de uma enzima de restrição ao modificar a sequência de reconhecimento, em geral ao adicionar grupos metila a seu DNA.

A alternativa correta é letra D) V, F, V, V, F.

( V ) Alvos das enzimas de restrição podem estar presentes em moléculas de DNA derivadas de vírus, bactérias, insetos ou humanos, inclusive.

VERDADEIRA: As enzimas de restrição reconhecem sequências de nucleotídeos específicas no DNA, chamadas de sítios de restrição. Esses sítios de restrição podem estar presentes em moléculas de DNA de diferentes fontes, como vírus, bactérias, insetos ou seres humanos.

( F ) São enzimas muito importantes e muito utilizadas no processo de replicação que é mimetizado no laboratório na técnica de PCR.

FALSA: As enzimas de restrição desempenham um papel importante na pesquisa genética, mas não estão envolvidas no processo de replicação do DNA que é mimetizado na técnica de PCR (Reação em Cadeia da Polimerase). No PCR, a DNA polimerase é a enzima central responsável pela amplificação do DNA. As enzimas de restrição são usadas para cortar o DNA em segmentos específicos, não para replicá-lo.

( V ) Uma enzima de restrição que reconhece uma sequência de quatro bases cortaria em teoria um grande fragmento de DNA a cada 256 pb.

VERDADEIRA: A sequência de quatro bases reconhecida por essa enzima de restrição atua como um alvo de corte. Toda vez que a enzima encontrar a mesma sequência, ocorrerá a quebra. Sabendo, que uma molécula de DNA é composta por uma sequência de pares de bases com adenina, timina, citosina e guanina, a probabilidade de encontrar uma sequência específica no DNA de forma aleatória é de 1 em 256. Isso ocorre porque existem 4⁴ = 256 combinações possíveis de sequências de quatro bases (4 opções para cada posição em uma sequência de quatro bases).

( V ) A maioria das sequências reconhecidas pelas enzimas de restrição tem 4 a 8 pares de bases de comprimento e reconhecem sequências palindrômicas – sequências que leem o mesmo (de 5′ para 3′) nas duas fitas DNA.

VERDADEIRA: Muitas enzimas de restrição reconhecem sequências de 4 a 8 pares de bases e, frequentemente, essas sequências são palindrômicas, o que significa que podem ser lidas da mesma maneira nas duas fitas do DNA. Isso facilita o corte simétrico do DNA, gerando extremidades coesivas ou coesas que podem ser facilmente ligadas a outras moléculas de DNA complementares.

( F ) Os mecanismos de corte do DNA, por meio das enzimas de restrição, são realizados através da quebra das ligações fosfodiéster em apenas uma das fitas do DNA, e por forças físicas na outra fita, gerando extremos cegos ou coesivos, dependendo da força de torção do DNA gerada após a ação da enzima.

FALSA: Quando as enzimas de restrição cortam o DNA, elas quebram as ligações fosfodiéster em ambas as fitas do DNA no local de reconhecimento. Isso pode resultar em extremidades coesivas (ou coesas) quando as extremidades cortadas são complementares ou extremidades cegas quando as extremidades não são complementares. O tipo de extremidade gerada depende da enzima específica e da sequência de reconhecimento.

Assim, a sequência das afirmações é: Verdadeira, Falsa, Verdadeira, Verdadeira, Falsa.

Portanto, a alternativa que apresenta a resposta CORRETA é a letra d)  V, F, V, V, F.